diplomsko delo
Nika Zaveršek (Avtor), Gregor Gunčar (Mentor)

Povzetek

Nanotelesa so variabilne domene HCAb (angl. heavy chain antibody), ki jih najdemo v družini Chamelidae. So majhna, stabilna, v obliki samostojne domene, imajo veliko afiniteto do antigena in jih je enostavno izražati v bakterijskih sistemih. Zaradi svojih dobrih lastnosti na veliko področjih prekašajo in izpodrivajo navadna tetramerna protitelesa. V diplomskem delu smo raziskovali dva mutanta nanotelesa M33 z afiniteto do MLKL. Mutanta, nanotelesi 4T5 in 3T1, sta bili pripravljeni tako, da bi lahko tvorili homodimer s pomočjo kobaltovih ionov. Avtoindukcijsko smo ju izrazili v bakterijskem sistemu BL21[DE3]. Izolirali smo ju iz inkluzijskih telesc in ju renaturirali ter očistili s pomočjo histidinske oznake s kolono IMAC na napravi FPLC. Oznako His smo odcepili s proteazo TEV. Nanotelesi 4T5 in 3T1 smo nanesli na kolono za kromatografijo z ločevanjem po velikosti, nato pa smo na kolono za kromatografijo z ločevanjem po velikosti nanesli še nanotelo 4T5 v prisotnosti kobaltovih ionov, da bi ugotovili, če pride do dimerizacije. Tvorba homodimera pod uporabljenimi pogoji ni potekla.

Ključne besede

nanotelesa;enodomensko protitelo;koordinacija kovinskih ionov;dimerizacija;inkluzijska telesca;diplomska dela;

Podatki

Jezik: Slovenski jezik
Leto izida:
Tipologija: 2.11 - Diplomsko delo
Organizacija: UL FKKT - Fakulteta za kemijo in kemijsko tehnologijo
Založnik: [N. Zaveršek]
UDK: 577.27(043.2)
COBISS: 1538424003 Povezava se bo odprla v novem oknu
Št. ogledov: 828
Št. prenosov: 299
Ocena: 0 (0 glasov)
Metapodatki: JSON JSON-RDF JSON-LD TURTLE N-TRIPLES XML RDFA MICRODATA DC-XML DC-RDF RDF

Ostali podatki

Sekundarni jezik: Angleški jezik
Sekundarni povzetek: Nanobodies are HCAb derived single-domain antibodies found in Chamelidae serum. Their small size, stability, high antigen affinity and ability of expression in bacterial systems are useful assets in research areas, where affinity is a useful property. We used two M33 nanobody mutants, which have MLKL affinity. Mutant nanobodies 4T5 and 3T1 were designed to form a homodimer in the presence of cobalt ions. Expression by autoinduction was performed in BL21[DE3]. Nanobodies were isolated from inclusion bodies and later refolded by sulfonation and renaturation. Purification was done via His-tag and IMAC on FPLC. We removed His-tag by TEV protease cleavage. Size exclusion liquid chromatography was used to test the dimerization of 4T5 nanobody, which did not occur under the conditions that were used.
Sekundarne ključne besede: nanobody;single-domain antibody;metal ion coordination;dimerisation;inclusion bodies;
Vrsta dela (COBISS): Diplomsko delo/naloga
Študijski program: 1000371
Konec prepovedi (OpenAIRE): 1970-01-01
Komentar na gradivo: Univ. v Ljubljani, Fak. za kemijo in kemijsko tehnologijo
Strani: 40 str.
ID: 11221113