magistrsko delo
Klara Gregorič (Avtor), Kristina Sepčić (Recenzent), Nataša Poklar Ulrih (Mentor), Nataša Poklar Ulrih (Član komisije za zagovor), Mojca Narat (Član komisije za zagovor), Kristina Sepčić (Član komisije za zagovor)

Povzetek

Pernizin je zunajcelična proteaza iz hipertermofilne arheje Aeropyrum pernix, aktivna v širokem temperaturnem in pH območju. Zunajcelični encimi so lahko pritrjeni na celično membrano ali pa so prosti. V tej nalogi smo skušali odgovoriti na vprašanje ali je pernizin prost ali pritrjen encim. Rekombinanten pernizin smo proizvedli v bakteriji Escherichia coli, iz arhejskih lipidov pa smo pripravili poenostavljene modele celične membrane, liposome. S sedimentacijskim testom smo pokazali, da se pernizin ne veže na liposome pripravljene iz arhejskih lipidov (arheosomi), te ugotovitve pa smo potrdili z azokazeinskim testom. Z uporabo več metod (fluorescenčne emisijske spektrometrije, cirkularnega dikroizma in merjenje fluorescenčne polarizacije z membransko sondo difenilheksatrienom) smo pokazali, da se sekundarna struktura pernizina ob dodatku liposomov ne spremeni bistveno, kar potrjuje odsotnost hidrofobnih povezav med pernizinom in arheosomi. Iz rezultatov pridobljenih z zgoraj navedenimi metodami smo zaključili, da je pernizin prost encim. Ker so prosti encimi značilni za biofilme, smo preverili ali tudi arheja Aeropyrum pernix tvori biofilme. S cimogramom smo dokazali proteolitično aktivnost v sloju, ki je nastal na površini erlenmajerice med gojenjem arheje, kar dokazuje, da lahko arheje Aeropyrum pernix tvorijo biofilme, katerih sestavni del je pernizin.

Ključne besede

rekombinanten pernizin;arheja A. pernix;liposomi;sedimentacijski test;azokazeinski test;cirkularni dikroizem;

Podatki

Jezik: Slovenski jezik
Leto izida:
Tipologija: 2.09 - Magistrsko delo
Organizacija: UL BF - Biotehniška fakulteta
Založnik: [K. Gregorič]
UDK: 577.15:57.088(043.2)
COBISS: 9350009 Povezava se bo odprla v novem oknu
Št. ogledov: 682
Št. prenosov: 221
Ocena: 0 (0 glasov)
Metapodatki: JSON JSON-RDF JSON-LD TURTLE N-TRIPLES XML RDFA MICRODATA DC-XML DC-RDF RDF

Ostali podatki

Sekundarni jezik: Angleški jezik
Sekundarni naslov: Interactions of recombinant pernisine with lipid membranes
Sekundarni povzetek: Pernisine, extracellular protease from hyper thermophilic archaea Aeropyrum pernix, is active in wide temperature and pH range. Secreted (extracellular) enzymes can be attached to the membrane or they can be free. The goal of this thesis was to determine whether pernisine is attached or free enzyme. Recombinant pernisine was produced in Escherichia coli, and liposomes, simplified models of cell membranes were prepared from archaeal lipids. With sedimentation test and azocasein test we showed that pernisine does not bind to the liposomes from archaeal lipids (archeosomes). Using several methods (fluorescence emission spectroscopy, circular dichroism, measurements of fluorescence polarization with membrane probe diphenylhexatriene) we showed that the secondary structure of pernisine in presence of liposomes is not changed significantly, which confirms the absence of hydrophobic interactions between pernisine and archeosomes. Using methods described above we concluded that pernisine is a free enzyme. Free enzymes are significant for biofilms, so we assumed that A. pernix is also forming biofilms. In flasks where archaea were cultivated, we observed a thin film. With zymogram we detected proteolytical activity in this film, which confirms our hypothesis that A. pernix is forming biofilms that consist of pernisine.
Sekundarne ključne besede: recombinant pernisine;archaea A. pernix;liposomes;sedimentation test;azocasein test;circular dichroism;
Vrsta dela (COBISS): Magistrsko delo/naloga
Študijski program: 0
Konec prepovedi (OpenAIRE): 1970-01-01
Komentar na gradivo: Univ. v Ljubljani, Biotehniška fak., Študij biotehnologije
Strani: XI, 47 f.
ID: 11224170