magistrsko delo
Špela Zupančič (Avtor), Jerneja Ambrožič (Recenzent), Matej Butala (Mentor), Matej Butala (Član komisije za zagovor), Jerneja Ambrožič (Član komisije za zagovor), Kristina Sepčić (Član komisije za zagovor)

Povzetek

Proteina RecA in LexA sta ključna proteina tako imenovanega odziva SOS, ki omogoča ohranitev integritete in strukture genoma bakterij, ki rastejo v stresnih, genotoksičnih razmerah. V tem odzivu pa se lahko sproži tudi prehod nekaterih bakteriofagov iz lizogenega v litičen cikel. Bakteriofag GIL01, ki okužuje bakterijo Bacillus thuringiensis, za vzpostavitev lizogenega cikla izkorišča gostiteljev protein LexA. Protein LexA se veže na tarčna mesta v promotorski regiji P1 bakteriofaga GIL01, to vezavo pa dodatno stabilizira protein gp7 tega bakteriofaga. Kompleks LexA-gp7 prepreči bakteriofagu prehod v litični cikel. V magistrski nalogi smo preverili, ali lahko protein gp7 prosto prehaja iz gojišča v bakterijo. Z afinitetno kromatografijo smo očistili protein gp7 in analogni protein DdrR iz bakterije Acinetobacter baumannii. Nadalje smo očistili protein gp7, katerega smo sklopili s signalnim zaporedjem YKKSNNPFSD, ki naj bi omogočilo vnos proteinov v bakterijo Bacillus subtilis. Za odstranitev afinitetne značke na amino-terminalnem koncu proteinov smo uporabili encim enterokinaza. Zasnovali smo test prehoda proteinov gp7 v Bacillus thuringiensis serovar israelensis, ki temelji na analizi promotorske aktivnosti P1 z β-galaktozidaznimi testi. Dokazali smo, da je protein gp7 stabilen v izrabljenem gojišču bakterije B. thuringiensis. Rezultati nakazujejo, da gp7 ali gp7 s signalno sekvenco ne prehajata prosto v bakterijo.

Ključne besede

protein gp7;signalne sekvence;inhibicija odziva SOS;

Podatki

Jezik: Slovenski jezik
Leto izida:
Tipologija: 2.09 - Magistrsko delo
Organizacija: UL BF - Biotehniška fakulteta
Založnik: [Š. Zupančič]
UDK: 577(043.2)
COBISS: 55208451 Povezava se bo odprla v novem oknu
Št. ogledov: 505
Št. prenosov: 128
Ocena: 0 (0 glasov)
Metapodatki: JSON JSON-RDF JSON-LD TURTLE N-TRIPLES XML RDFA MICRODATA DC-XML DC-RDF RDF

Ostali podatki

Sekundarni jezik: Angleški jezik
Sekundarni naslov: ǂThe ǂanalysis of bacteriophage GIL01 gp7 protein characteristics
Sekundarni povzetek: The proteins RecA and LexA are important factors in the SOS response that enables bacterial genome integritiy under stressful genotoxic conditions. SOS response also induces bacteriophages transition from the lysogenic to the lytic cycle. The bacteriophage GIL01 infects the bacterium Bacillus thuringiensis and requires host`s LexA repressor to establish and maintain the lysogenic cycle. LexA binds to specific sites in the P1 promoter region of the GIL01 bacteriophage. The LexA protein can bind gp7 which additionally enhances the binding of LexA to DNA and prevents the bacteriophage from switching to the lytic cycle. We tested whether gp7 could freely enter into the bacterium. We purified gp7 and its analog from the bacterium Acinetobacter baumannii, the protein DdrR with affinity chromatography and also gp7 with the signal sequence YKKSNNPFSD, which presumably allows the fusion protein to enter into the bacterium Bacillus subtilis. To remove the histidine affinity tag at the amino-terminal part of the protein, we used enterokinase. We designed the gp7 protein transformation in Bacillus thuringiensis serovar israelensis based on analyzes of the activity of the P1 promoter with β-galactosidase assays. We proved that gp7 is stable in the spent culture medium. The results show that gp7 or its analog carrying the signal sequence cannot freely migrate into the bacterium.
Sekundarne ključne besede: gp7 protein;signal sequences;inhibition of SOS response;
Vrsta dela (COBISS): Magistrsko delo/naloga
Študijski program: 0
Konec prepovedi (OpenAIRE): 1970-01-01
Komentar na gradivo: Univ. Ljubljana, Biotehniška fak.
Strani: X, 63, [1] f.
ID: 12589005