diplomsko delo
Ana Babnik (Avtor), Gregor Gunčar (Mentor)

Povzetek

Domena cisteinske proteaze (CPD) je del večfunkcijskega samoprocesirajočega toksina, ki vsebujejo ponavljajoče motive (MARTX) iz Vibrio cholerae. Pri vstopu MARTX toksina v citosol evkariontske celice se zaradi prisotnosti InsP6 aktivira CPD. Ta ima avtoproteolitično aktivnost, saj cepi toksin na samostojne domene, ki povzročijo kovalentno povezovanje aktina, kar vodi v depolarizacijo aktinskega citoskeleta. V diplomskem delu smo z metodo kloniranja s sestavljanjem in vivo pripravili plazmid z zapisom za rekombinantni protein, sestavljen iz GFP, CPD in heksahistidinske oznake. Bakterije Escherichia coli DH5α smo transformirali z vektorjem pET22b, ki je vseboval zapis za naš fuzijski protein. Z metodo PCR na osnovi ene kolonije smo preverili, katere kolonije so ustrezne za izolacijo plazmidne DNA. Nukleotidno zaporedje plazmida je bilo določeno z metodo po Sangerju in potrjeno s poravnavo zaporedij.

Ključne besede

domena cisteinske proteaze;zeleni fluorescenčni protein;kloniranje s sestavljanjem in vivo;rekombinantni proteini;fuzijski protein;plazmidi;diplomska dela;

Podatki

Jezik: Slovenski jezik
Leto izida:
Tipologija: 2.11 - Diplomsko delo
Organizacija: UL FKKT - Fakulteta za kemijo in kemijsko tehnologijo
Založnik: [A. Babnik]
UDK: 577.112(043.2)
COBISS: 116811523 Povezava se bo odprla v novem oknu
Št. ogledov: 73
Št. prenosov: 29
Ocena: 0 (0 glasov)
Metapodatki: JSON JSON-RDF JSON-LD TURTLE N-TRIPLES XML RDFA MICRODATA DC-XML DC-RDF RDF

Ostali podatki

Sekundarni jezik: Angleški jezik
Sekundarni naslov: Preparation of plasmid for expression of fusion protein composed of GFP and protease from Vibrio cholerae
Sekundarni povzetek: Cysteine protease domain (CPD) is a domain of multifunctional autoprocessing repeats-in-toxin (MARTX) toxin from Vibrio cholerae. Upon entry of MARTX in eukaryotic cytosol CPD is activated by InsP6. Autoproteolytic processing of toxin by CPD causes covalent actin cross-linking that leads to actin depolarization and cell rounding. We prepared a plasmid for expression of a recombinant fusion protein composed of GFP, CPD and hexahisitdine tag using in vivo assembly cloning method. pET22b vector with our recombinant fusion protein was transformed into Escherichia coli DH5α. Presence of vector with the right construct in bacterial colonies was verified by colony PCR. Plasmid DNA was isolated from suitable colonies and the sequence was determined by Sanger sequencing. We confirmed the sequence of the recombinant protein with sequence alignment.
Sekundarne ključne besede: cysteine protease domain;green fluorescent protein;in vivo assembly cloning;recombinant protein;Univerzitetna in visokošolska dela;
Vrsta dela (COBISS): Diplomsko delo/naloga
Študijski program: 1000371
Konec prepovedi (OpenAIRE): 1970-01-01
Komentar na gradivo: Univ. v Ljubljani, Fak. za kemijo in kemijsko tehnologijo, UNI Biokemija
Strani: 29 str.
ID: 15841034