magistrsko delo
Tjaša Pungert (Avtor), Tanja Kunej (Mentor), Elvira Maličev (Član komisije za zagovor), Martin Štimpfel (Komentor)

Povzetek

Namen naše raziskave je bilo preveriti, kako dva načina zamrzovanja humanega semena vplivata na viabilnost in fragmentacijo DNA semenčic. V raziskavi je sodelovalo 69 moških prostovoljcev s koncentracijo semenčic vsaj 15*106/mL ter skupno gibljivostjo nad 40 %. Vsak vzorec humanega semena smo delili na tri volumsko enake alikvote, pri čemer smo en alikvot ocenili kot nativno seme, en alikvot smo zamrznili po protokolu počasnega zamrzovanja humanega semena, ki se uporablja na Ginekološki kliniki Univerzitetnega kliničnega centra Ljubljana, en alikvot humanega semena pa smo vitrificirali. Nativnemu vzorcu humanega semena ter odmrznjenim vzorcem po krioperzervaciji smo ocenili gibljivost, živost, zrelost ter fragmentacijo DNA. Zrelost smo določali na dva načina in sicer zrelost jedrnih beljakovin preko barvanja z anilin modrim ter zrelost semenčic preko vezave semenčic na hialuron. Za ocenjevanje DNA poškodb smo uporabili pretočno citometrijo. Naši rezultati kažejo, da zamrzovanje humanega semena zmanjša preživelost in gibljivost semenčic ter poveča fragmentacijo DNA. V zrelosti semenčic med nativnimi vzorci ter vzorci po krioperzervaciji nismo opazili razlik. Vitrifikacija v naši raziskavi ni imela statistično značilno boljšega vpliva na preživelost, gibljivost ali ohranjenost DNA po odmrzovanju humanega semena kakor počasno zamrzovanje. Slabši rezultati vitalnosti in povišana raven poškodb DNA po zamrzovanju humanega semena so skladni z našimi pričakovanji, nismo pa pričakovali tako primerljivih rezultatov med vzorci po počasnem zamrzovanju in vzorci po vitrfikiaciji. Nekatere druge raziskave na področju in uveljavljenost vitrifikacije v kliničnem okolju za zamrzovanje jajčnih celic in zarodkov nakazujejo, da bi drugačni pristopi vitrifikacije v prihodnosti lahko omogočili njeno uveljavitev v kliničnem okolju tudi za zamrzovanje humanega semena.

Ključne besede

humano seme;počasno zamrzovanje;vitrifikacija;viabilnost;fragmentacija DNA;

Podatki

Jezik: Slovenski jezik
Leto izida:
Tipologija: 2.09 - Magistrsko delo
Organizacija: UL BF - Biotehniška fakulteta
Založnik: [T. Pungert]
UDK: 606:618.177-089.888.11:591.463.1:57.086.13(043.2)
COBISS: 162403331 Povezava se bo odprla v novem oknu
Št. ogledov: 53
Št. prenosov: 12
Ocena: 0 (0 glasov)
Metapodatki: JSON JSON-RDF JSON-LD TURTLE N-TRIPLES XML RDFA MICRODATA DC-XML DC-RDF RDF

Ostali podatki

Sekundarni jezik: Angleški jezik
Sekundarni naslov: Effects of two cryopreservation protocols on viability and dna fragmentation in human sperm samples
Sekundarni povzetek: The purpose of our research was to determine how two cryopreservation protocols affect viability and DNA fragmentation in human sperm. The research included 69 volunteers with minimum 15*106 sperm cells per millilitre and 40 % motility. Each human semen sample was divided into three aliquots. One aliquot was evaluated as native sperm sample, one was slow freezed and one was vitrified. Slow freezing was performed by the procedure currently used in Division of Obstetrics and Gynaecology, University Medical Centre Ljubljana. Native sperm samples and samples after cryopreservation were evaluated for sperm motility, viability, maturity and DNA fragmentation. Sperm maturity was evaluated by protamine aniline blue staining and by hyaluron binding assay. DNA fragmentation was evaluated using flow cytometry. Our results demonstrate that cryopreservation decreases sperm viability and motility, while it increases DNA fragmentation in human sperm. No significant difference in sperm maturity was found. Vitrification did not enable better viability, motility or DNA preservation than slow freezing. We correctly expected decreased viability, motility and increased DNA fragmentation in human sperm samples following cryopreservation compared to native human semen, but we incorrectly expected greater differences between sperm samples after slow freezing and after vitrification. Nonetheless, some other research and the fact that vitrification is routinely used for oocyte and embryo cryopreservation suggest vitrification could become the method of choice for human semen cryopreservation as well.
Sekundarne ključne besede: human sperm;slow freezing;vitrification;viability;DNA fragmentation;
Vrsta dela (COBISS): Magistrsko delo/naloga
Študijski program: 0
Konec prepovedi (OpenAIRE): 1970-01-01
Komentar na gradivo: Univ. v Ljubljani, Biotehniška fak., Študij biotehnologije
Strani: 1 spletni vir (1 datoteka PDF (VIII, 53 str.))
ID: 19849259