Ločevanje izooblik monoklonskih protiteles z induciranim prehodom pH

magistrsko delo

Maja Šedivy (Avtor), Aleš Podgornik (Mentor), Aleš Podgornik (Član komisije za zagovor), Branka Javornik (Član komisije za zagovor), Mojca Narat (Član komisije za zagovor)

Povzetek

Kromatografske metode zagotavljajo visoko stopnjo čistosti biotehnološko pridobljenih proteinov. Najpogosteje se proteine spira z raztopino soli. Čiščenje s spremembo v pH-vrednosti mobilne faze je teže nadzorovati, vendar je zelo privlačno, saj naknadno odstranjevanje soli ni potrebno. Možnost lažje kontrole prehodov pH pri izolaciji so pokazale mešane kolone, sestavljene iz kombinacije močnih in šibkih ionskih izmenjevalcev. Namen magistrskega dela je bilo ustvariti položen inducirani prehod pH, ki ga dosežemo s preklopom mobilnih faz z različnim pH. Na osnovi induciranega prehoda pH smo testirali ločevanje izooblik monoklonskih protiteles (mAb). Mešano kolono smo naredili z izborom ustreznih ionskih izmenjevalcev: šibki z izjemno majhnimi porami, v katere proteini ne morejo vstopati, namenjen tvorjenju induciranega prehoda pH, in porozen močni, namenjen vezavi tarčnih proteinov. Dvojna funkcija mešane kolone je omogočila ustvarjanje stabilnega prehoda pH z visoko kapaciteto za izbran protein. Kombinacija z različnimi mobilnimi fazami je pokazala, da lahko s koncentracijo in pH-vrednostjo pufra dobro kontroliramo položnost prehoda pH. Šibki (AG® 4-x4) in močni (Fractogel® EMD TMAE Hicap (M)) anionski izmenjevalec sta tako posamezno kot tudi v mešanici delovala dobro, medtem ko z intermediatnim izmenjevalcem (Bio-RexTM 5) nismo dobili pozitivnih rezultatov. Ločevanje izooblik mAb je bilo delno uspešno. V prihodnje bi bilo treba najti optimalno razmerje ionskih izmenjevalcev v mešani koloni in ustrezen pufrski sistem, ki bi omogočal boljše ločevanje različic mAb.

Ključne besede

monoklonska protitelesa;zaključni procesi;ionska izmenjevalna kromatografija;pH vrednost;induciran prehod pH;ločevanje s spremembo pH;

Podatki

Jezik:	Slovenski jezik
Leto izida:	2017
Tipologija:	2.09 - Magistrsko delo
Organizacija:	UL FKKT - Fakulteta za kemijo in kemijsko tehnologijo
Založnik:	[M. Šedivy]
UDK:	602.44:543.544.17:577.112(043.2)
COBISS:	8894329
Št. ogledov:	1356
Št. prenosov:	831
Ocena:	0 (0 glasov)
Metapodatki:

Ostali podatki

Sekundarni jezik:	Angleški jezik
Sekundarni naslov:	Separation of monoclonal antibody isoforms with induced pH gradients
Sekundarni povzetek:	Chromatographic separation techniques ensure purification quality of biotechnically produced proteins. Most of the time, proteins are eluted with salt gradients. Purification with pH gradients is usually difficult to control, however it is appealing because subsequent salt removal steps are unnecessary. Mixed-bed chromatography columns have shown to be an effective way of performing pH gradient-based protein separation. The approach of present work was to create a linear pH gradient, generated by a step change in pH. A separation of protein charge variants with the mixed-bed concept was demonstrated for a monoclonal antibody mixture. A selection of appropriate ion exchange resins has given a mixed-bed column with a dual function: a small-pore weak base resin serves for intracolumn generation of pH gradients, and a large-pore strong base resin serves for interacting with proteins, gaining high binding capacity. A combination of different mobile phases has shown that concentration and pH value of the buffer can regulate the duration of the induced pH gradient. Weak (AG® 4-x4) and strong (Fractogel® EMD TMAE Hicap (M)) anion exchanger have turned to be good candidates in our experiments, however, intermediate anion exchanger (Bio-RexTM 5) has not given us positive results. The separation of monoclonal antibody isoforms has been partially achieved. In future, one would have to define an optimal ratio of weak and strong ion exchange resins, and a suitable buffer system with a higher chromatographic sensitivity for the separation of isoforms.
Sekundarne ključne besede:	monoclonal antibodies;downstream processing;ion exchange chromatography;pH value;induced pH gradient;separation with changing of pH;
Vrsta dela (COBISS):	Magistrsko delo/naloga
Študijski program:	0
Komentar na gradivo:	Univ. v Ljubljani, Biotehniška fak., Študij biotehnologije
Strani:	XI, 68 f., [2] f. pril.
ID:	10915197