magistrsko delo
Margareta Mordej (Avtor), Sabina Berne (Recenzent), Kristina Sepčić (Mentor), Kristina Sepčić (Član komisije za zagovor), Maruša Novak (Član komisije za zagovor), Mojca Narat (Član komisije za zagovor), Sabina Berne (Član komisije za zagovor), Maruša Novak (Komentor)

Povzetek

Pomembna lastnost egerolizinov je vezava na različne lipide, lipidne vezikle ali lipidne dvosloje. Egerolizini lahko oblikujejo pore sami ali v kombinaciji s partnerskim proteinom z domeno MACPF (angl. membrane attack complex/perforin). Zaradi tega so uporabni kot označevalci lipidov in primerni za zatiranje škodljivih organizmov. Eden izmed pomembnih vezavnih partnerjev egerolizinov je ceramid fosfoetanolamin (CPE), sfingolipid, ki je najbolj zastopan v membranah nevretenčarjev (predvsem žuželk) in praživali. V sklopu magistrskega dela smo se osredotočili na tri egerolizine: nigerolizin A2 (NigA2) iz nitaste glive Aspergillus niger, pleurotolizin A2 (PlyA2) iz gobe Pleurotus eryngii in RahU iz bakterije Pseudomonas aeruginosa z namenom bolje opredeliti njihove vezavne lastnosti na lipidne vezikle, sestavljene iz različnih deležev CPE in holesterola (Hol) ali drugih sterolov. To smo preverili s testom sedimentacije in s površinsko plazmonsko resonanco. S testom sproščanja kalceina iz različnih lipidnih veziklov, smo spremljali permeabilizacijsko aktivnost PlyA2 v kombinaciji s partnerskim proteinom pleurotolizinom B (PlyB). Odkrili smo, da je PlyA2 najprimernejši marker za označevanje membran, ki vsebujejo CPE, medtem ko sta NigA2 in RahU za to manj primerna. Za uspešno vezavo PlyA2 na lipidne vezikle je potrebnih vsaj 5 molskih % CPE in 30 molskih % Hol. Prav tako se dani egerolizin veže na lipidne vezikle sestavljene iz CPE in različnih sterolov (najmočnejša vezava je bila zaznana v primeru 7-dehidroholesterola in β-sitosterola). Pokazali smo tudi, da PlyA2 v kombinaciji s PlyB permeabilizira membrane lipidnih veziklov, ki vsebujejo CPE in različne sterole, kar nakazuje na možnost uporabe teh dveh proteinov za zatiranje škodljivih organizmov.

Ključne besede

egerolizini;nigerolizin A2;RahU;pleurotolizin A2;ceramid fosfoetanolamin;različni steroli;

Podatki

Jezik: Slovenski jezik
Leto izida:
Tipologija: 2.09 - Magistrsko delo
Organizacija: UL BF - Biotehniška fakulteta
Založnik: [M. Mordej]
UDK: 606:63:577.115(043.2)
COBISS: 9009273 Povezava se bo odprla v novem oknu
Št. ogledov: 975
Št. prenosov: 377
Ocena: 0 (0 glasov)
Metapodatki: JSON JSON-RDF JSON-LD TURTLE N-TRIPLES XML RDFA MICRODATA DC-XML DC-RDF RDF

Ostali podatki

Sekundarni jezik: Angleški jezik
Sekundarni naslov: Binding characterization of selected aegerolysins to lipid vesicles with different composition
Sekundarni povzetek: Important feature of aegerolysins is binding to various lipids, lipid vesicles or lipid bilayers. Aegerolysins can form pores directly or in combination with a partnering protein containing a MACPF (membrane attack complex/perforin) domain. They can therefore be used as specific lipid markers and for the pest control. One of the important binding partners of aegerolysins is ceramide phosphoethanolamine (CPE), a sphingolipid that is very abundant in the membranes of the invertebrates (particularly insects) and protozoa. Within M. Sc. Thesis we focused on three aegerolysins: nigerolysin A2 (NigA2) from the filamentous fungus Aspergillus niger, pleurotolysin A2 (PlyA2) from the mushroom Pleurotus eryngii and RahU from the bacterium Pseudomonas aeruginosa. Our aim was to determine their binding characteristics to the lipid vesicles composed of different molar ratios of CPE and cholesterol (Chol) or other sterols using sedimentation assay and surface plasmon resonance. Monitoring the calcein release from various lipid vesicles, the permeabilization activity of aegerolysin PlyA2 in combination with its partnering protein, pleurotolysin B (PlyB), was tested. We have discovered that PlyA2 is the most appropriate marker for labeling membranes containg CPE, while NigA2 and RahU are less suitable. For the successful binding of PlyA2 to lipid vesicles, at least 5 mol % of CPE and 30 mol % of Chol are required. In addition, PlyA2 binds to lipid vesicles composed of CPE and various sterols (the strongest binding was detected in the case of 7-dehydrocholesterol and β-sitosterol). We have also shown that PlyA2 in combination with PlyB permeabilizes membranes of lipid vesicles containing CPE and various sterols, indicating their potential to be used as pest control agents.
Sekundarne ključne besede: aegerolysins;nigerolysin A2;pleurotolysin A2;ceramide phosphoethanolamine;different sterols;
Vrsta dela (COBISS): Magistrsko delo/naloga
Študijski program: 0
Komentar na gradivo: Univ. v Ljubljani, Biotehniška fak., Študij biotehnologije
Strani: XI, 53 f., [2] f. pril.
ID: 10944562