diplomska naloga
Povzetek
Pri večini bolnikov s policitemijo vera (PV) in pri približno polovici bolnikov z esencialno
trombocitemijo (ET) in primarno mielofibrozo (PM) lahko dokažemo pridobljeno
somatsko mutacijo JAK2 V617F. Nadaljnje raziskave so pokazale, da v približno 1-9 %
bolnikov z ET in v 5-11 % bolnikov s PM ugotovimo somatske mutacije v genu za
trombopoetinski receptor MPL. Slednje se pri drugih mieloproliferativnih novotvorbah
(MPN) pojavijo redko. Določitev mutacije JAK2 V617F in mutacij v genu MPL sta
pomembni dodatni preiskavi pri postavitvi diagnoze mieloproliferativnih novotvorb.
Zamenjavi aminokisline triptofan za levcin (MPL W515L) in lizin (MPL W515K) na
mestu 515 aminokislinskega zaporedja receptorja za trombopoetin sta najpogosteje
ugotovljeni pridobljeni mutaciji trombopoetinskega receptorja pri bolnikih z ET in PM.
Mutaciji najverjetneje povzročata, da je beljakovina aktivna brez vezanega liganda.
Namen našega dela je bil vpeljava metode določitve mutacij MPL W515L/K v receptorju
za trombopoetin, z načinom verižne reakcije s polimerazo v realnem času (uporaba
reagenčnega kompleta MPL MutaScreenTM Kit (Ipsogen, Francija)) in določitev deleža
bolnikov z ET, ki so imeli mutaciji MPL W515L/K. Oblikovali smo delovni hipotezi in
sicer, da reagenčni komplet MPL MutaScreenTM Kit (Ipsogen, Francija) omogoča
določitev mutacij MPL W515L/K in da se mutaciji MPL W515L/K pojavljata pri 1-9 %
bolnikov z ET.Da bi hipotezi dokazali smo iz vzorcev venske krvi 77 bolnikov z ET izolirali granulocite z
gradientnim centrifugiranjem preko fikola. Iz granulocitov smo izolirali celokupno DNA in
ji spektrofotometrično izmerili koncentracijo ter čistočo. Prisotnost mutacij MPL
W515L/K smo nato določili s kvantitativno verižno reakcijo s polimerazo v realnem času
(qPCR) in alelno diskriminacijo.Prisotnost mutacije MPL W515L/K smo dokazali pri štirih (5 %) bolnikih z ET, kar je v
skladu s podatki iz literature. Ugotovili smo tudi, da je mutacija MPL W515L pogostejša,
saj smo jo dokazali pri treh (4 %) bolnikih z ET. Mutacijo MPL W515K smo dokazali pri
enem (2 %) bolniku. Reagenčni komplet MPL MutaScreenTM Kit (Ipsogen, Francija)
omogoča določanje mutacij MPL W515L/K.
Ključne besede
esencialna trombocitemija;izolacija granulocitov;verižna reakcija;mutacije v genu MPL;alelna diskriminacija;
Podatki
Jezik: |
Slovenski jezik |
Leto izida: |
2011 |
Izvor: |
Ljubljana |
Tipologija: |
2.11 - Diplomsko delo |
Organizacija: |
UL FFA - Fakulteta za farmacijo |
Založnik: |
[L. Kovačič] |
UDK: |
616-074 |
COBISS: |
2949233
|
Št. ogledov: |
1435 |
Št. prenosov: |
237 |
Ocena: |
0 (0 glasov) |
Metapodatki: |
|
Ostali podatki
Sekundarni jezik: |
Angleški jezik |
Sekundarni naslov: |
ǂThe ǂthrombopoietin receptor W515L abd W515K mutation detection by real time polymerase chain reaction in essential thrombocytemia patients |
Vrsta dela (COBISS): |
Diplomsko delo |
Strani: |
VI, 48 f. |
ID: |
12053300 |