diplomsko delo
Amadeja Volarič (Avtor), Zlata Luthar (Mentor)

Povzetek

V predhodno pripravljene listne izsečke tobaka (Nicotiana tabacum L.) smo s pomočjo seva LBA4404 bakterije Agrobacterium tumefaciens (A. t.), ki je imela vključen plazmid pART27 2mgfp5 ER ali pCAMBIA1390 DsRed, transformirali dva markerska in dva selekcijska gena. Fenotipsko izražanje obeh markerskih transgenov gfp oz. DsRed smo spremljali v živih celicah tobaka, ki so imele sintetiziran zeleno oz. rdeče fluorescentni protein. Za ločitev transformiranih celic in tkiv od netransformiranih smo uporabili selekcijska transgena nptII in hptII odpornost na antibiotik kanamicin oz. higromicin. Po okužbi izsečkov z A. t. in plazmidom pART27 2mgfp5 ER je bila uspešnost regeneracije 82,65 % in po okužbi z genskim konstruktom A. t. pCAMBIA1390 DsRed 77,89 %. Med vitalne regenerante smo šteli tiste, ki so imeli korenine in pokončne liste. Takih je bilo na gojišču s kanamicinom 63 oz. 77,78 %. Ti so bili tudi pokazatelji uspešnosti transforamcije z nptII transgenom. Po transformaciji izsečkov z A. t. pCAMBIA1390 DsRed je nastalo 51 vitalnih regenerantov. Ti regeneranti so bili sposobni razgrajevati aktivno sestavino higromicina. Uspešnost transformacije je bila 68,92 % za hptII transgen. Pri 4 regenerantih oz. 10 % se niso namnožili fragmenti dolžine 211 bp značilni za DsRed transgen, kljub temu da smo pri njih zasledili prisotnost rdeče fluorescentnega proteina.

Ključne besede

tobak;Nicotiana tabacum;transformacija;Agrobacterium tumefaciens;DNA;transgen;fenotipska analiza;molekulska analiza;

Podatki

Jezik: Slovenski jezik
Leto izida:
Tipologija: 2.11 - Diplomsko delo
Organizacija: UL BF - Biotehniška fakulteta
Založnik: [A. Volarič]
UDK: 602.6:582.930.3:663.9:601.4:577.21(043.2)
COBISS: 68253187 Povezava se bo odprla v novem oknu
Št. ogledov: 438
Št. prenosov: 45
Ocena: 0 (0 glasov)
Metapodatki: JSON JSON-RDF JSON-LD TURTLE N-TRIPLES XML RDFA MICRODATA DC-XML DC-RDF RDF

Ostali podatki

Sekundarni jezik: Angleški jezik
Sekundarni naslov: DNA analysis of tobacco (Nicotiana tabacum L.) after transformation by Agrobacterium tumefaciens
Sekundarni povzetek: Two marker and two selection genes were transformed into pre-prepared tobacco leaf explants (Nicotiana tabacum L.) by Agrobacterium tumefaciens (A. t.) strain LBA4404, which included plasmid pART27 2mgfp5 ER or pCAMBIA1390 DsRed. Phenotypic expression of gfp or DsRed marker transgenes was studied in live tobacco cells that had synthesized green or red fluorescent protein. To separate the transformed cells and tissues from the non-transformed ones, we used the selection transgenes nptII and hptII resistance to the antibiotic kanamycin or hygromycin. After infection of the explants by A. t. and plasmid pART27 2mgfp5 ER, the regeneration efficiency was 82.65 % and after infection with the A. t. pCAMBIA1390 DsRed 77.89 %. Among the vital regenerants we considered those that had roots and upright leaves. There were 63 (77.78 %) on kanamycin medium. These were also indicators of the success of nptII transgene transformation. After transformation of the explants by A. t. pCAMBIA1390 DsRed was formed 51 viable regenerants. These regenerants were able to degrade the active ingredient hygromycin. The transformation success rate was 68.92 % for the hptII transgene. At 4 regenerants (10 %) fragments of 211 bp length characteristic of the DsRed transgene did not amplify, despite the presence of a red fluorescent protein.
Sekundarne ključne besede: tobacco;transformation;transgene;fenotipe analysis;molecular analysis;
Vrsta dela (COBISS): Diplomsko delo/naloga
Študijski program: 0
Konec prepovedi (OpenAIRE): 1970-01-01
Komentar na gradivo: Univ. v Ljubljani, Biotehniška fak., Oddelek za agronomijo
Strani: X, 38 f.
ID: 13089001