magistrsko delo
Bor Klančnik (Avtor), Boris Turk (Mentor), Brigita Lenarčič (Član komisije za zagovor), Gregor Gunčar (Član komisije za zagovor)

Povzetek

Grancim B je serinska proteaza, ki se nahaja predvsem v citotoksičnih granulah imunskih celic, citotoksičnih limfocitih T in naravnih celicah ubijalkah. Pri imunskem odgovoru je ključni mediator sprožitve celične smrti v tarčnih celicah, vendar pa njegovo izražanje ni omejeno samo na efektorske celice imunskega sistema. V patoloških stanjih je njegovo izražanje povečano v številnih tkivih. Zaradi tega je primeren biološki označevalec, ki je uporaben za namene diagnostike in razumevanje poteka različnih bolezni. Bioluminiscenca je posebna zvrst kemiluminiscence, ki jo najdemo v različnih vrstah organizmov. Gre za encimsko reakcijo, kjer encim luciferaza pretvori substrat luciferin v produkt oksiluciferin. Pri tem se sprosti energija v obliki svetlobe. Zaradi zelo dobrega razmerja med šumom okolja in signalom reakcije je primerna za analitično spremljanje širokega spektra bioloških procesov in vitro ter in vivo. Modifikacije substrata bioluminiscenčne reakcije omogočajo razvoj sond za namene vizualizacije procesov tako in vitro, v celicah, kot tudi v laboratorijskih živalih. V magistrskem delu smo pripravili sev P. pastoris, ki izraža rekombinanten grancim B. Potrdili smo uspešno izražanje in izločanje aktivnega grancima B v gojišče. Rekombinanten grancim B smo primerjali s komercialnim rekombinantnim in nativnim grancimom B. Razvili smo in vitro bioluminiscenčno metodo merjenja aktivnosti za grancim B. S pripravljenim grancimom B smo dokazali selektivnost bioluminiscenčne sonde Z-AAD-NHLuc za grancim B v primerjavi z grancimi A, D, H, G in K.

Ključne besede

encimi;serinske proteaze;grancim B;apoptoza;kvasovka P. pastoris;bioluminiscenca;sonde;selektivnost;magistrska dela;

Podatki

Jezik: Slovenski jezik
Leto izida:
Tipologija: 2.09 - Magistrsko delo
Organizacija: UL FKKT - Fakulteta za kemijo in kemijsko tehnologijo
Založnik: [B. Klančnik]
UDK: 577.15(043.2)
COBISS: 93326851 Povezava se bo odprla v novem oknu
Št. ogledov: 138
Št. prenosov: 32
Ocena: 0 (0 glasov)
Metapodatki: JSON JSON-RDF JSON-LD TURTLE N-TRIPLES XML RDFA MICRODATA DC-XML DC-RDF RDF

Ostali podatki

Sekundarni jezik: Angleški jezik
Sekundarni naslov: Characterization of bioluminescent probe for granzyme B
Sekundarni povzetek: Grancim B is a serine protease found primarily in cytotoxic granules of immune cells, cytotoxic T lymphocytes, and natural killer cells. It is a key mediator of triggering cell death in target cells, as a part of immune response. However, its expression is not limited to effector cells of the immune system. In many pathological conditions, its expression is increased in numerous tissues. For this reason, it is a suitable biological marker, useful for the purposes of diagnosing and understanding the course of various diseases. Bioluminescence is a special type of chemiluminescence observed in different types of organisms. It is an enzymatic reaction where the enzyme luciferase converts the substrate luciferin into an oxyluciferin. This releases energy in the form of light. Due to the very good ratio between ambient noise and reaction signal, it is suitable for analytical monitoring of a wide range of biological processes in vitro and in vivo. Substrate modifications of the bioluminescence reaction allow the development of probes for the purposes of visualization of processes both in tissue and in laboratory animals. In the master's thesis, we prepared a strain of P. pastoris, which expresses recombinant granzyme B. We confirmed the successful expression and secretion of active granzyme B into the medium. Recombinant granzyme B was compared with native and commercial recombinant granzyme B. We developed an in vitro bioluminescence imaging method for granzyme B detection. The selectivity of the bioluminescent probe Z-AAD-NHLuc for granzyme B was determined with the prepared recombinant granzyme B and compared to granzymes A, D, H, G and K
Sekundarne ključne besede: granzyme B;P. pastoris;bioluminescence;probe;selectivity;
Vrsta dela (COBISS): Magistrsko delo/naloga
Študijski program: 1000377
Komentar na gradivo: Univ. v Ljubljani, Fak. za kemijo in kemijsko tehnologijo, smer Biokemija
Strani: 69 str.
ID: 14240278