magistrsko delo
Maša Lah (Avtor), Miha Ravnik (Mentor), Mitja Zidar (Komentor)

Povzetek

Delo obravnava fizikalno optimizacijo pogojev za čiščenje proteinov in povezanih metod za iskanje optimalnih pogojev za minimizacijo agregacije. Metodološko delo temelji na kombinaciji eksperimentov in modelske analize eksperimentov, pri čemer sta glavni uporabljeni eksperimentalni metodi gelska izključitvena kromatografija in intrinzična triptofanska fluorescenca. Pripravili smo več formulacij z različnimi monoklonskimi protitelesi pri različnih pH, ionskih močeh in proteinskih koncentracijah. Z meritvijo triptofanske fluorescence smo opredelili vpliv posameznih dejavnikov na konformacijsko stabilnost proteinov v formulacijah. Opazili smo temeljne razlike v obnašanju monoklonskih teles, ki kažejo na različne mehanizme denaturacije in agregacije. Z gelsko izključitveno kromatografijo smo določili delež agregatov v formulacijah po izpostavljenosti nizkemu pH. S kombinacijo meritev smo sklepali o mehanizmih agregacije monoklonskih protiteles in o vlogi konformacijske stabilnosti v začetnih korakih agregacije. Ugotovili smo, da premik k višjim valovnim dolžinam izsevane svetlobe ob izpostavljenosti nizkemu pH kaže na ireverzibilno, k nižjim pa na reverzibilno agregacijo proteinov v formulacijah. Delo je prispevek k izboljšanju procesa čiščenja terapevtskih proteinov, ki je nujen za proizvajanje pacientu varnih zdravil.

Ključne besede

biofizika;proteini;agregacija;biološka zdravila;monoklonska protitelesa;gelska izključitvena kromatografija;fluorescenčna spektroskopija;intrinzična proteinska fluorescenca;

Podatki

Jezik: Slovenski jezik
Leto izida:
Tipologija: 2.09 - Magistrsko delo
Organizacija: UL FMF - Fakulteta za matematiko in fiziko
Založnik: [M. Lah]
UDK: 577.322
COBISS: 120526851 Povezava se bo odprla v novem oknu
Št. ogledov: 24
Št. prenosov: 9
Ocena: 0 (0 glasov)
Metapodatki: JSON JSON-RDF JSON-LD TURTLE N-TRIPLES XML RDFA MICRODATA DC-XML DC-RDF RDF

Ostali podatki

Sekundarni jezik: Angleški jezik
Sekundarni naslov: Physical optimisation of biopharmaceutical purification processes
Sekundarni povzetek: This master’s thesis explores the physical optimisation of protein purification conditions and related methods for finding optimal conditions to minimize aggregation. The methodological work is based on a combination of experiments and model analysis of the experiments, with the main experimental methods used being the size-exclusion chromatography and intrinsic tryptophan fluorescence. Several formulations were prepared with different monoclonal antibodies at different pH, ionic strengths and protein concentrations. By measuring the intrinsic fluorescence of tryptophan residues, we determined the influence of individual factors on the conformational stability of proteins in formulations. We observed fundamental differences in the behavior of the monoclonal antibodies, which imply different denaturation and aggregation mechanisms. The presence of aggregates in the formulations after exposure to low pH was determined by size-exclusion chromatography. With the combination of measurements from both methods we determined the aggregation mechanisms of the monoclonal antibodies and the role of conformational stability in the initial steps of aggregation. We found that a shift toward higher emission wavelengths upon exposure to low pH indicates irreversible, whereas a shift toward lower emission wavelengths indicates reversible protein aggregation. This work is a contribution towards the improvement of therapeutic protein purification process, which is necessary for a safe use of biopharmaceuticals.
Sekundarne ključne besede: biophysics;proteins;aggregation;biopharmaceuticals;monoclonal antibodies;size-exclusion chromatography;intrinsic protein fluorescence;fluorescence spectroscopy;
Vrsta dela (COBISS): Magistrsko delo/naloga
Študijski program: 0
Komentar na gradivo: Univ. v Ljubljani, Fak. za matematiko in fiziko, Oddelek za fiziko
Strani: 53 str.
ID: 16391492