diplomsko delo
Mark Loborec (Avtor), Miha Pavšič (Mentor)

Povzetek

α-aktinin je aktin vezavni protein, ki igra pomembno vlogo pri vrsti celičnih struktur, od kontraktilnega obroča do citoskeleta in sarkomer, sodeluje pa tudi pri premikanju celic. Pojavlja se v obliki dimera, v katerem je vsaka podenota sestavljena iz aktin vezavne domene, vratu, spektrinskih ponovitev in kalmodulinu podobne domene. Poznamo na kalcij občutljive in na kalcij neobčutljive oblike α-aktinina. V tej nalogi smo želeli raziskati, kje se zgodijo najpomembnejše konformacijske spremembe ob vezavi kalcija na kalcij občutljiv α-aktinin 1. V ta namen smo – na osnovi kristalne strukture α-aktinina 1 z vezanim Ca2+ – ¬načrtali, klonirali in izrazili tri mutante, od katerih vsak zaklene del strukture α-aktinina v kalcij vezano obliko. Mutante smo nato izolirali z različnimi kromatografskimi tehnikami in za mutante, v katere smo uvajali cisteinske ostanke na različne verige – kar bi moralo voditi do nastanka kovalentno povezanih dimerov – na NaDS-PAGE, preverili, ali se podenote kovalentno povežejo v dimere. Tvorbo dimerov smo potrdili pri enem od dveh mutantov, pri katerih smo to pričakovali. Pri drugem mutantu smo tvorbo disulfidnih vezi poskusili vzpodbuditi še z inkubacijo v oksidativnem okolju in v prisotnosti kalcija, a smo bili neuspešni. Mutante bodo uporabljene za analizo tvorbe aktinskih snopov.

Ključne besede

aktin;alfa-aktinin;kalcij;konformacijske spremembe;mutacije;diplomska dela;

Podatki

Jezik: Slovenski jezik
Leto izida:
Tipologija: 2.11 - Diplomsko delo
Organizacija: UL FKKT - Fakulteta za kemijo in kemijsko tehnologijo
Založnik: [M. Loborec]
UDK: 577.112(043.2)
COBISS: 169265923 Povezava se bo odprla v novem oknu
Št. ogledov: 43
Št. prenosov: 6
Ocena: 0 (0 glasov)
Metapodatki: JSON JSON-RDF JSON-LD TURTLE N-TRIPLES XML RDFA MICRODATA DC-XML DC-RDF RDF

Ostali podatki

Sekundarni jezik: Angleški jezik
Sekundarni naslov: Expressing conformationally locked alpha-actinin
Sekundarni povzetek: α-actinin is an actin-binding protein which plays an important role in many cell structures, from the contractile ring to the cytoskeleton and sarcomeres, and is also involved in cell motility. It forms a dimer, both units of which are composed of an actin-binding domain, neck region, spectrin repeats and calmodulin-like domain. Calcium sensitive and insensitive forms are known to exist. In this work we wanted to identify where the most important conformational changes happen upon calcium binding to the calcium sensitive α-actinin 1. For this purpose we have – based upon the crystal structure of α-actinin 1 bound to Ca2+ – constructed, cloned and expressed three mutants, each of which locks part of the structure of α-actinin into the calcium-bound form. We have then purified the mutants using a variety of chromatographic techniques, and, for the mutants in which we have introduced cysteine residues on different chains – which should lead to the formation of covalently bound dimers – checked for covalent dimer formation on SDS-PAGE. We have confirmed the formation of dimers by one of the the two mutants in which we expected such formation to occur. We have tried to encourage the formation of dimers in the other mutant by incubation in an oxidizing environment and in the presence of calcium, but were unsuccessful. The mutants will be used for analysis of formation of actin bundles.
Sekundarne ključne besede: alpha-actinin;calcium;conformational changes;Beljakovine;Univerzitetna in visokošolska dela;
Vrsta dela (COBISS): Diplomsko delo/naloga
Študijski program: 1000371
Konec prepovedi (OpenAIRE): 1970-01-01
Komentar na gradivo: Univ. v Ljubljani, Fak. za kemijo in kemijsko tehnologijo, UNI Biokemija
Strani: 31 str.
ID: 19904955