diplomsko delo
Špela Sotlar (Avtor), Gregor Gunčar (Mentor)

Povzetek

Neisseria gonorrhoeae je patogena bakterija, ki povzroča spolno prenosljivo bolezen gonorejo. Njena sposobnost izmikanja imunskemu sistemu in povzročanju večkratnih okužb povzroča težave pri zdravljenju bolezni. Trenutno zdravljenje s cefalosporini postaja vse manj učinkovito, s pojavom odpornih sevov v Aziji, Evropi in Severni Ameriki, zato je nujna identifikacija novih tarčnih proteinov. Obg protein je evolucijsko ohranjena GTPaza, ki je odgovorna za bakterijski odgovor na stres, separacijo kromosomov in zorenje ribosomov. Veže se na ribosomsko podenoto 50S in ob hidrolizi GTP povzroči pravilno zvitje podenote. Ob zbitju gena se preživetje bakterije drastično zmanjša. Zapis za gen obg smo vstavili v vektor pMSCG7 s pomočjo IVA kloniranja. Konstrukt smo nato izolirali iz celic E. coli DH5α in vstavili v celice ekspresijskega seva E. coli BL21 [DE3] pLys-S. Po določitvi optimalne temperature za izražanje, 37 °C, smo izrazili in izolirali približno 30 mg proteina. Manjšo količino očiščenega proteina smo poskusili kristalizirati, na rezultate še čakamo. V nadaljnjem delu bomo identificirali pogoje za rast kristalov tega proteina in določili njegovo strukturo.

Ključne besede

Neisseria gonorrhoeae;Obg protein;IVA kloniranje;diplomska dela;

Podatki

Jezik: Slovenski jezik
Leto izida:
Tipologija: 2.11 - Diplomsko delo
Organizacija: UL FKKT - Fakulteta za kemijo in kemijsko tehnologijo
Založnik: [Š. Sotlar]
UDK: 577.112(043.2)
COBISS: 171655939 Povezava se bo odprla v novem oknu
Št. ogledov: 89
Št. prenosov: 6
Ocena: 0 (0 glasov)
Metapodatki: JSON JSON-RDF JSON-LD TURTLE N-TRIPLES XML RDFA MICRODATA DC-XML DC-RDF RDF

Ostali podatki

Sekundarni jezik: Angleški jezik
Sekundarni naslov: Cloning and production of the Obg protein from the bacterium Neisseria gonorrhoeae
Sekundarni povzetek: Neisseria gonorrhoeae is a pathogenic bacterium that causes the sexually transmitted disease gonorrhoea. Its ability to evade the immune system and causes recurrent infec-tions poses challenges in disease treatment. The current treatment with cephalosporins is becoming increasingly ineffective due to the emergence of resistant strains in Asia, Eu-rope, and North America, making the identification of new target proteins imperative. The Obg protein is an evolutionarily conserved GTPase responsible for the bacterial re-sponse to stress, chromosome separation, and ribosome maturation. It binds to the ribo-somal 50S subunit and, upon GTP hydrolysis, induces proper folding of the subunit. When the obg gene is knocked out, bacterial survival drastically decreases. The gene sequence for obg was inserted into the pMSCG7 vector using IVA cloning. We then isolated the construct from E. coli DH5α cells and introduced it into the expression strain of E. coli BL21 [DE3] pLys-S. After determining the optimal expression tempera-ture at 37 °C, we expressed and isolated approximately 30 mg of protein. We attempted to crystallise a small quantity of the purified protein, and the results are still pending. In subsequent work, we will identify conditions for the growth of this protein's crystals and determine its structure.
Sekundarne ključne besede: Neisseria gonorrhoeae;Obg protein;IVA cloning;Beljakovine;Univerzitetna in visokošolska dela;
Vrsta dela (COBISS): Diplomsko delo/naloga
Študijski program: 1000371
Konec prepovedi (OpenAIRE): 1970-01-01
Komentar na gradivo: Univ. v Ljubljani, Fak. za kemijo in kemijsko tehnologijo, UNI Biokemija
Strani: 56 str.
ID: 19912998