Uporaba kalmodulina za renaturacijo rekombinantnega encimsko neaktivnega mutanta amoditoksina A

diplomsko delo

Matevž Merljak (Avtor), Igor Križaj (Mentor)

Povzetek

Amoditoksini (Atx) so sekretorne fosfolipaze tipa A2 (sPLA2) iz strupa modrasa (Vipera ammodytes ammodytes), ki imajo presinaptično nevrotoksično aktivnost, imenovano tudi β-nevrotoksičnost. Navkljub mnogim odkritjem v zadnjih letih mehanizem njihovega delovanja še ni v celoti poznan, prav tako ni pojasnjena vloga encimske aktivnosti Atx v tem procesu. Za namen študija le-te so raziskovalci razvili rekombinantni mutant AtxA(D49S), ki nima encimske aktivnosti. Omenjen mutant pridobivamo iz bakterij, kjer se odlaga v obliki inkluzijskih telesc, zato ga je potrebno zviti v nativno obliko (renaturacija) ter očistiti. Ker je izkoristek tega procesa običajno precej nizek, je bil cilj pričujočega dela izboljšati izkoristek renaturacije z uporabo kalmodulina (CaM), poznanega liganda Atx, v vlogi šaperona. S takšnim postopkom smo uspešno izolirali nativno zvit mutant AtxA(D49S), vendar je dobljeni izkoristek nižji od pričakovanega.

Ključne besede

amoditoksin;nevrotoksičnost;rekombinantni proteini;renaturacija;kalmodulin;diplomska dela;

Podatki

Jezik:	Slovenski jezik
Leto izida:	2024
Tipologija:	2.11 - Diplomsko delo
Organizacija:	UL FKKT - Fakulteta za kemijo in kemijsko tehnologijo
Založnik:	[M. Merljak]
UDK:	577.112(043.2)
COBISS:	201142275
Št. ogledov:	41
Št. prenosov:	2
Ocena:	0 (0 glasov)
Metapodatki:

Ostali podatki

Sekundarni jezik:	Angleški jezik
Sekundarni naslov:	Refolding a recombinant enzymatically inactive mutant ammoditoxin A using calmodulin
Sekundarni povzetek:	Ammoditoxins (Atx) are type A2 secretory phospholipases (sPLA2) from the venom of the nose-horned viper (Vipera ammodytes ammodytes) with presynaptic neurotoxicity (β neurotoxicity). Despite many recent discoveries in this field, the underlying mechanism and the role of Atx's enzymatic activity therein remains poorly understood. To gain better insight, researchers have developed an enzymatically inactive recombinant mutant AtxA(D49S). Mutant variant is produced in bacteria, where it aggregates into insoluble inclusion bodies. Thus, it needs to be refolded and purified before use, but the yield of such refolding is usually quite low. The goal of our work was to improve the refolding yield using a known Atx ligand calmodulin (CaM) as a chaperone. We show that AtxA(D49S) can be successfully refolded using such an approach, however the resulting yield is lower than expected.
Sekundarne ključne besede:	ammoditoxin;calmodulin;refolding;Beljakovine;Fosfolipaze;Univerzitetna in visokošolska dela;
Vrsta dela (COBISS):	Diplomsko delo/naloga
Študijski program:	1000371
Komentar na gradivo:	Univ. v Ljubljani, Fak. za kemijo in kemijsko tehnologijo, UNI Biokemija
Strani:	1 spletni vir (1 datoteka PDF (V, 39 str.))
ID:	24511964