diplomsko delo
Tjaša Lešnik (Avtor), Katarina Černe (Mentor)

Povzetek

Rak jajčnikov je najbolj smrtonosen rak ženskega reproduktivnega sistema. Zaradi svoje skrite lokacije, izredno raznolikih oblik tumorjev in pomanjkanja učinkovitega presajanja za zgodnje odkrivanje bolezni, je pogosto diagnosticiran šele v napredovanih fazah. Najpogostejša in hkrati najagresivnejša oblika je serozni rak visoke stopnje malignosti (HGSOC). Standardna terapija predstavlja zdravljenje z zdravili na osnovi platine kot je karboplatin, vendar učinkovitost zdravljenja močno omejuje razvoj kemorezistence. Študije se tako v zadnjem času osredotočajo na odkrivanje novih biomarkerjev, s katerimi bi bilo mogoče napovedati odpornost celic na zdravljenje. Velik potencial imajo bakrovi prenašalci ATP7B, ki so sposobni zniževanja znotrajcelične koncentracije platine, s pomočjo črpanja molekul v vezikularne strukture. Poleg prizadevanj za lažje napovedovanje kemorezistence se znanstveniki ukvarjajo z identifikacijo novih učinkovin, ki bi povečale citotoksičnost karboplatina in s tem učinkovitost zdravljenja odpornih oblik tumorjev. Na tem področju je obetavna spojina brefeldin A – gre za glivni metabolit, ki povzroča razpad Golgijevega aparata in moti vezikularni transport. Doslej so reagent preizkusili le na omejenem naboru celičnih linij raka jajčnikov, ki niso vključevale celic s histologijo HGSOC in se tudi niso osredotočale na vpliv brefeldina A na citotoksičnost karboplatina in izražanje ATP7B. V okviru diplomskega dela smo želeli preveriti vpliv karboplatina na celični liniji PEO1 in OAW28 - gre za celični liniji s histologijo HGSOC. Celična linija PEO1 je bila izolirana iz bolnice občutljive na zdravljenje s platino, medtem pa je bila celična linija OAW28 izolirana iz kemorezistentne bolnice. Zaradi pomanjkanja dostopnih protokolov, smo tega najprej optimizirali s pomočjo reagenta alamarBlue. Ugotovili smo, da je učinkovitost karboplatina pri obeh celičnih linijah močno odvisna od odmerka. Pri tem smo pri celični liniji OAW28 prvi zaznali pojav hormeze – celičnega odziva, kjer so nižje koncentracije karboplatina pospešile rast celic, višje koncentracije pa so inhibirale rast celic in zmanjšale njihovo viabilnost. Dokazali smo, da je celična linija PEO1 na zdravljenje s platino bolj občutljiva, kot celična linija OAW28. Osredotočili smo se tudi na učinek brefeldina A in njegov vpliv na citotoksičnost karboplatina. Sinergije brefeldina A s karboplatinom nismo zaznali. Problem je bila predvsem citotoksičnost samega brefeldina A zaradi previsoke koncentracije. S pomočjo pretočne citometrije smo kot prvi dokazali ekspresijo ATP7B v obeh celičnih linijah, pri čemer med njima ni bilo zaznati razlik v ravni izražanja transporterja. Medtem je brefeldin A statistično značilno zmanjšal izražanje ATP7B pri celični liniji OAW28, pri celični liniji PEO1 pa na izražanje transporterja ni imel vpliva. V prihodnje bi bilo potrebno izvesti dodatne poskuse za potrditev naših rezultatov, optimizirati koncentracijo brefeldina A ter raziskati njegov mehanizem preko katerega vpliva na zmanjšano ekspresijo ATP7B pri celični liniji OAW28.

Ključne besede

citotoksičnost karboplatina;brefeldin A;ATP7B;ATPazni bakrov prenašalec beta;celične linije;diplomska dela;

Podatki

Jezik: Slovenski jezik
Leto izida:
Tipologija: 2.11 - Diplomsko delo
Organizacija: UL FKKT - Fakulteta za kemijo in kemijsko tehnologijo
Založnik: [T. Lešnik]
UDK: 577.2:618.11-006(043.2)
COBISS: 253506051 Povezava se bo odprla v novem oknu
Št. ogledov: 127
Št. prenosov: 14
Ocena: 0 (0 glasov)
Metapodatki: JSON JSON-RDF JSON-LD TURTLE N-TRIPLES XML RDFA MICRODATA DC-XML DC-RDF RDF

Ostali podatki

Sekundarni jezik: Angleški jezik
Sekundarni naslov: Transporter ATP7B and the effect of Brefeldin on the cytotoxicity of carboplatin in an ovarian cancer cell line
Sekundarni povzetek: Ovarian cancer is the most deadly cancer of the female reproductive system. Due to its hidden location, extremely diverse tumor types, and lack of effective screening for early detection, it is often diagnosed only in advanced stages. The most common and aggressive form is high-grade serous ovarian cancer (HGSOC). Standard therapy involves treatment with platinum-based drugs such as carboplatin, but the effectiveness of treatment is greatly limited by the development of chemoresistance. Recent studies have therefore focused on identifying new biomarkers that could be used to predict cell resistance to treatment. ATP7B copper transporters have great potential, as they are capable of reducing intracellular platinum concentrations by pumping molecules into vesicular structures. In addition to efforts to improve the prediction of chemoresistance, scientists are working to identify new agents that would increase the cytotoxicity of carboplatin and thus the effectiveness of treatment for resistant forms of tumors. A promising compound in this area is brefeldin A, a fungal metabolite that causes the breakdown of the Golgi apparatus and disrupts vesicular transport. So far, the reagent has only been tested on a limited set of ovarian cancer cell lines that did not include cells with HGSOC histology and did not focus on the effect of brefeldin A on carboplatin cytotoxicity and ATP7B expression. In the future, it would be necessary to conduct more experiments to achieve higher accuracy of results, optimize the concentration of brefeldin A, and investigate its mechanism of action through which it affects the reduced expression of ATP7B in the OAW28 cell line. In this work, we aimed to examine the effect of carboplatin on the PEO1 and OAW28 cell lines, which are cell lines with HGSOC histology. The PEO1 cell line was isolated from a platinum-sensitive patient, while OAW28 originated from a chemoresistant one. Due to the lack of protocols, we optimized conditions using the alamarBlue reagent and found that carboplatin effectiveness in both cell lines is strongly dose-dependent. In OAW28, we observed hormesis - low carboplatin concentrations promoted growth, while higher concentrations inhibited it and reduced viability. PEO1 proved more sensitive to platinum treatment than OAW28. We also tested the effect of brefeldin A on carboplatin cytotoxicity but detected no synergism, as the main issue was the intrinsic cytotoxicity of brefeldin A at high concentrations. Using flow cytometry, we were the first to demonstrate ATP7B expression in both cell lines, with no difference in expression levels. However, brefeldin A significantly reduced ATP7B expression in OAW28 but not in PEO1. Future experiments should confirm these results, optimize brefeldin A concentration, and further investigate its mechanism in reducing ATP7B expression in OAW28.
Sekundarne ključne besede: ovarian cancer;cytotoxicity of carboplatin;brefeldin A;ATPase copper transporting beta;Novotvorbe jajčnikov;Baker;Univerzitetna in visokošolska dela;
Vrsta dela (COBISS): Diplomsko delo/naloga
Študijski program: 1000371
Konec prepovedi (OpenAIRE): 1970-01-01
Komentar na gradivo: Univ. v Ljubljani, Fak. za kemijo in kemijsko tehnologijo, UNI Biokemija
Strani: 1 spletni vir (1 datoteka PDF (41 str.))
ID: 27245403