doktorska disertacija
Terezija Ciringer (Avtor), Mojca Garantini (Lektor), Jana Ambrožič-Dolinšek (Mentor), Jana Ambrožič-Dolinšek (Član komisije za zagovor), Mitja Kaligarič (Član komisije za zagovor), Jelka Šuštar Vozlič (Član komisije za zagovor), Nina Šajna (Član komisije za zagovor)

Povzetek

Hladnikia pastinacifolia Rchb. je monotipična endemična vrsta Apiaceae z zelo ozkim območjem razširjenosti, ki se pojavljajo samo v Sloveniji. Shranjevanje z zamrzovanjem (krioprezervacija) je ena od dejavnosti, s katero bi lahko bistveno prispevali k ohranjanju te redke in potencialno ogrožene vrste. Namen naše disertacije je razviti krioprezervacijske postopke za trajno hrambo na ultra nizkih temperaturah (-196 °C) v tekočem dušiku in prevetriti ali ta postopek vpliva na mrfologijo in gensko stabilnost te vrste. Razvili smo dva krioprezervacijska postopka: inkapsulacijsko dehidracijo (ID) in inkapsulacijsko vitrifikacijo (IV), optimizirali posamezne faze krioprezervacije in ju preizkusili na več različnih genotipih. Raziskali smo vpliv osmoprotektantov, v predkultivaciji, inkapsulaciji -polimerizaciji, osmoprotekciji, dehidraciji, če je šlo za ID ali vitrifikaciji, če je šlo za IV, na sposobnost preživetja in ponovne rasti po odmrzovanju. Pri vseh testiranih linijah so poganjki najbolje preživeli in se regenerirali po predkultivaciji čez noč v tekočem MS gojišču s 0,4 M saharozo; inkapsulaciji v MS s 3 - Na-alginata z 0,4 M saharozo in 1 M glicerolom in polimerizaciji v MS z 0,4 M saharozo, osmoproteciji z 0,4 M saharozo in 1 M glicerolom pri ID in z 0,4 M saharozo in 2 M glicerolom pri IV, po 150 minutah dehidracije v eksikatorju (ID) ali 85 minutah dehidracije (vitrifikacije) s PVS2 (IV). Po ID je preživelo 44 % in se regeneriralo 33 % vcepkov. Po postopkih IV je preživelo 65 % in se regeneriralo 52 % vcepkov. Nadalnji razvoj in morfologijo poganjkov smo spremljali še eno leto po krioprezervaciji. Zamrznjeni poganjki so v nadalnjem razvoju morfološko podobni nezamrznjenim; oboji podobno regeneriajo poganjke in korenine. Po enem letu smo na in vitro vzgojenem rastlinskem materialu, ki je izviral iz krioprezerviranih poganjkov po postopkih ID in IV in na ne krioprezerviranih poganjkih, ocenili tudi gensko stabilnost z RAPD tehniko. Med nezamrznjenimi in zamrznjenimi poganjki H. pastinacifolia je bila z RAPD označevalci zaznana zelo nizka stopnja variabilnosti. Po analizi AMOVA je večina krioprezerviranih rastlin gensko identična tistim, ki niso bile zamrznjene v TD. Obe metodi sta primerni za dolgoročno hrambo (krioprezervacijo) genskih viriov H. pastinacifolia pri ultra nizkih temperaturah (-196 °C).

Ključne besede

rebrinčevolistna hladnikovka;Hladnikia pastinacifolia;Apiaceae;kobulnice;Slovenija;endemična rastlinska vrsta;tkivna kultura;mikropropagacija;krioprezervacija;inkapsulacijska dehidracija;vitrifikacija;inkapsulacijska vitrifikacija;genetska stabilnost;RAPD;disertacije;Rastlinstvo;Disertacije;Fiziologija rastlin;Tkivne kulture;Razmnoževanje;

Podatki

Jezik: Slovenski jezik
Leto izida:
Tipologija: 2.08 - Doktorska disertacija
Organizacija: UM FNM - Fakulteta za naravoslovje in matematiko
Založnik: T. Ciringer]
UDK: 57.086.13/.14:582.795(497.4)(043.3)
COBISS: 22390024 Povezava se bo odprla v novem oknu
Št. ogledov: 2573
Št. prenosov: 165
Ocena: 0 (0 glasov)
Metapodatki: JSON JSON-RDF JSON-LD TURTLE N-TRIPLES XML RDFA MICRODATA DC-XML DC-RDF RDF

Ostali podatki

Sekundarni jezik: Angleški jezik
Sekundarni naslov: Optimizing cryopreservation of (Hladnikia pastinacifolia Rchb.) by encapsulation-dehydration and vitrification
Sekundarni povzetek: Hladnikia pastinacifolia Rchb. is a monotypic endemic Apiaceae with an extremely narrow distribution area, occurring only in Slovenia. Cryopreservation could be one of several conservation activities which would help conserve this rare and potentially endangered species. The aim of this work was to successfully cryopreserve Hladnikia pastinacifolia Rchb. (Apiaceae), using encapsulation-dehydration (ED) and encapsulation-vitrification (EV). The effect of osmoprotectants in encapsulation/polymerization and osmoprotection, dehydration or vitrification on viability and regrowth were investigated. The morphology, the regeneration capacity and genetic stability of in vitro plant material originating from cryopreserved and non-cryopreserved shoots were evaluated one year after treatment. RAPD markers were used to estimate genetic variation. For all tested lines, the highest rates of shoot regeneration and multiplication were obtained after preculture overnight in 0.4 M sucrose, encapsulation/polymerized with 3 % Na-alginate in MS with 0.4 M sucrose and 1 M glycerol following polymerization in MS with 0.4 M sucrose and osmoprotection with 0.4 M sucrose and 1 M glycerol for ED and with 0.4 M sucrose and 2 M glycerol for EV, ending with dehydration for 120 minutes in exsiccator (ED) vitrification for 85 minutes in PVS2 (EV). Under these conditions, 53 % regrowth was achieved after ED, and 65 % regrowth after EV. Both methods could be applicable for the long-term cryopreservation of H. pastinacifolia germplasm. The cryopreserved shoots were morphologically similar to non-cryopreserved shoots, with a similar regeneration capacity in both shoots and roots. Between the cryopreserved and non-cryopreserved shoots of H. pastinacifolia, only a low level of RAPD variability was exhibited. After analysis by AMOVA, most cryopreserved plants proved genetically identical to those that were frozen in liquid nitrogen (LN). Both, ED and EV methods are suitable for long-term storage of genetic material from Hladnikia pastinacifolia Rchb.freeze at ultra-low temperatures (-196).
Sekundarne ključne besede: Hladnikia pastinacifolia;Slovenia;endemic plant species;Apiaceae;micropropagation;cryopreservation;encapsulation dehydration;encapsulation vitrification;tissue culture;genetic stability;RAPD;dissertations;
URN: URN:SI:UM:
Vrsta dela (COBISS): Doktorska disertacija
Komentar na gradivo: Univ. v Mariboru, Fak. za naravoslovje in matematiko
Strani: XIX f., 138 str.
ID: 9140029