magistrsko delo
Maša Strašek (Avtor), Tomaž Bratkovič (Mentor), Aleš Podgornik (Član komisije za zagovor), Urh Černigoj (Komentor)

Povzetek

Monoklonska protitelesa predstavljajo eno izmed najpomembnejših in vsestranskih skupin bioloških učinkovin. Za izolacijo in čiščenje terapevtskih protiteles uporabljamo pretežno afinitetno kromatografijo, ki temelji na bakterijskih imunoglobulin-vezavnih proteinih (npr. stafilokoknem proteinu A in streptokoknem proteinu G), a ima le-ta številne pomanjkljivosti. Cilj dela je bil pripraviti in ovrednotiti afinitetno monolitno kromatografsko kolono na osnovi peptidnega liganda za čiščenje in izolacijo imunoglobulinov G (IgG). Pripravili smo afinitetni koloni s stacionarno fazo iz polimetakrilatnega monolita in premrežene agaroze. Na funkcionalizirano površino nosilcev smo prek distančnikov tris(2-aminoetil)amina in bromoacetata imobilizirali peptidni ligand, označen s C-končnim cisteinskim ostankom. S sistemom HPLC smo analizirali dinamično vezavno kapaciteto IgG pripravljenih kromatografskih kolon. Pri agarozni peptidni koloni smo potrdili vezavo IgG, pri monolitni peptidni koloni pa do vezave ni prišlo. Na enako funkcionaliziran monolitni nosilec smo imobilizirali še druge modelne ligande, kot so oligonukleotidi (prek aminske ali tiolne skupine) ter protein A (prek cisteinskega ostanka). Tako pripravljene kromatografske kolone smo primerjali z monolitnimi kolonami z enakim ligandom, a z drugačno funkcionalizacijo. Z določanjem dinamične vezavne kapacitete smo potrdili delovanje vseh. Sklepamo, da hidrofobna narava peptidnega liganda IgG ni kompatibilna s prav tako relativno hidrofobnim polimetakrilatnim monolitnim nosilcem. Domnevamo, da zaradi hidrofobnih interakcij med obema peptidni ligand ni dostopen za vezavo protiteles.

Ključne besede

afinitetna kromatografija;monolit;CIM;peptidni ligand;imunoglobulini;

Podatki

Jezik: Slovenski jezik
Leto izida:
Tipologija: 2.09 - Magistrsko delo
Organizacija: UL FFA - Fakulteta za farmacijo
Založnik: [M. Strašek]
UDK: 602.44:543.544:616-097.3(043.2)
COBISS: 154999299 Povezava se bo odprla v novem oknu
Št. ogledov: 251
Št. prenosov: 66
Ocena: 0 (0 glasov)
Metapodatki: JSON JSON-RDF JSON-LD TURTLE N-TRIPLES XML RDFA MICRODATA DC-XML DC-RDF RDF

Ostali podatki

Sekundarni jezik: Angleški jezik
Sekundarni naslov: Preparation and evaluation of affinity chromatographic column based on a peptide ligand for immunoglobulin isolation
Sekundarni povzetek: Monoclonal antibodies constitute one of the most important and versatile groups of biological drugs. Affinity chromatography based on bacterial immunoglobulin-binding proteins (e.g. staphylococcal protein A and streptococcal protein G) is typically used for isolation and purification of therapeutic antibodies, but it has many shortcomings. The aim of this work was to construct and evaluate an affinity monolithic chromatographic column based on a peptide ligand for the purification and isolation of immunoglobulin G (IgG). Affinity columns with polymethacrylate monolith and cross-linked agarose stationary phases were prepared. A peptide ligand labeled with a C-terminal cysteine residue was coupled to the functionalized supports via tris(2-aminoethyl)amine and bromoacetate spacers. The IgG dynamic binding capacity of the chromatographic columns was analyzed using an HPLC system. IgG binding was confirmed for the peptide: agarose matrix, but not for the peptide: monolith matrix. Using the same coupling chemistry, we prepared affinity matrices functionalized with different model ligands, such as oligonucleotides (via amino and sulfhidryl groups) and protein A (via a cysteine residue), and compared them to those carrying the same ligands but immobilized in a different way. All the affinity matrices were functional judging from the determined dynamic binding capacity. We conclude that the hydrophobic nature of the peptide IgG ligand is not compatible with the relatively hydrophobic polymethacrylate monolithic support. We assume that due to hydrophobic interactions between the two, the peptide is not accessible for antibody binding.
Sekundarne ključne besede: affinity chromatography;monolith;peptide ligand;immunoglobulins;
Vrsta dela (COBISS): Magistrsko delo/naloga
Študijski program: 0
Konec prepovedi (OpenAIRE): 1970-01-01
Komentar na gradivo: Univ. v Ljubljani, Biotehniška fak., Študij biotehnologije
Strani: 1 spletni vir (1 datoteka PDF (XIII, 59 str.))
ID: 19135205